天津胜发生物技术有限公司

通用名称：人表皮生长因子受体2(Her2/neu)检测试剂盒（酶联免疫吸附法）

本产品用于体外定量检测人血清样本中的表皮生长因子受体2(Her2/neu)。

Her2/neu是致癌基因（erbB-2）编码的一种蛋白，分子量为185,000道尔顿（简称p185），该致癌基因家族编码的细胞表面受体含有细胞间酪氨酸激酶活性，结构上与表皮生长因子受体（erbB-1）相似，是人表皮生长因子受体家族成员之一^1-3。自从20世纪80年代中期Her2/neu致癌基因及其编码蛋白被报道以来，其在部分乳癌的发展和转移中发挥重要作用^4-6。检测Her2/neu可用于监测血液中Her2水平高于15 ng/mL的乳腺癌转移患者，检测结果应与该患者临床其它诊断程序和信息，如病理学检测等，结合使用进行乳腺癌管理。

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法。包被液中含有一株抗Her2胞外区(ECD)的单克隆抗体，包被微孔板制成固相抗体，当加入的待测血清样品中含有Her2或Her2校准品时，可与微孔板中吸附的抗Her2抗体结合，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的另一抗Her2单克隆抗体时，即可与微孔板中第一抗体捕获的Her2结合，经充分洗涤后，加入酶联免疫反应TMB底物，产生的颜色反应与血清样品中存在的Her2或Her2校准品的含量在一定范围内呈正比。当颜色反应一定时间后，加入酸性终止液以终止颜色反应。在酶标检测仪上，测定450 nm（参考波长630 nm）的光吸收值，就可获得校准曲线和待测人血清样品中Her2的浓度。

规格组成	96测试/盒	48测试/盒	成份
1. 包被酶标板	1块（96孔）	1块（48孔）	抗Her2鼠源单克隆抗体包被的酶标板。
2. 酶标抗体	1管，0.2 mL	1管，0.1 mL	酶标抗Her2鼠源单克隆抗体、胎牛血清、磷酸缓冲液。
3. 校准品	7管，0.8 mL/管浓度(ng/mL)分别为：20 、 10、 5、 2.5 、 1.25、 0.63、 0.16。	7管，0.3 mL/管浓度(ng/mL)分别为：20、10、5、2.5 、 1.25、 0.63、 0.16。	重组人Her2胞外区蛋白、胎牛血清、磷酸缓冲液。
4. 质控品	1管，1 mL	1管，0.5 mL	能分泌Her2胞外区蛋白的细胞培养上清每批质控品靶值范围另附。
5. 空白对照	1管，0.8 mL	1管，0.2mL	磷酸缓冲液、吐温-20、牛血清白蛋白。
6. 20×洗涤液	1瓶，50 mL	1瓶，25 mL	磷酸缓冲液、吐温-20。
7. 稀释液	1瓶，25 mL	1瓶，13 mL	磷酸缓冲液、吐温-20、牛血清白蛋白。
8. 显色液	1瓶，12 mL	1瓶，7 mL	四甲基联苯胺（TMB）底物液。
9. 终止液	1瓶，12 mL	1瓶，7 mL	1 M HCl。
10. 封板膜	3张	1张
11. 样品稀释板	1块	1块

注：不同批次试剂盒成份不能混用。所提供试剂不可以其他来源试剂替代。

人表皮生长因子受体2（Her2/neu）的定量检测无国际约定参考测量程序和国际约定校准品，不能在计量上溯源到SI。因此本试剂盒以西门子Her2定量测定试剂盒（化学发光法）作为制造商选定测量程序，检测一批校准品，同时与理论值相比较。已被赋值的校准品将作为企业参考品，用于标定其他批次的校准品，或可直接用作产品校准品。

去离子水/纯净蒸馏水（符合实验室纯净水标准）；微量加样器；移液器和移液管；振荡器/摇床；酶标仪；离心机。

开封/瓶后，酶标板放入铝箔袋中封口干燥保存，其它试剂要及时放回2-8 ℃保存，有效期1个月。

酶联免疫测定仪（仪器测定值范围应在OD：0.001-3.000之间），测定波长450nm，参比波长630nm。

血清：按照国家临床实验室标准协会建议采用下列措施处理和储存血液样品：使用静脉穿刺术通用预防措施收集血液；1500 rpm离心10 min，离心前使血清样品充分凝结；保持样品加盖封闭并始终竖直向上，禁止使用室温下保存长于8小时的样品；若测试不能在8小时之内完成，紧密封闭，置于2-8 ℃；若样品未在24小时之内完成测试，在-20 ℃或以下保存。冷冻的样品使用前应解冻，完全混合并离心以保证结果的一致性。避免反复冻融。

（1）洗涤液（1×）：以去离子水或蒸馏水将20×洗涤液稀释20倍，轻混以防起泡，混匀后使用。稀释后的洗涤液pH为7.2-7.4，保存于2-8 ℃，7天内使用。

（2）酶标抗体：用稀释液作50倍稀释，现用现配（1小时内使用）。

（1）样品稀释：待检样品（血清）先用稀释液作20倍稀释（5 μL样品+95 μL 稀释液），如果有样品检测超过线性上限，可继续做20倍以上稀释。

（2）确定所需孔数：空白对照、校准品、样品、质控品。移除多余孔条密封保存于2-8 ℃。

（3）在酶标板孔中分别加入（请做好加样的顺序标记和记录）：

校准品孔：从7个校准品管里，各取100 μL，按照浓度由低至高的顺序将校准品加入酶标板中，每个浓度要更换新的吸头。

（4）在上述（3）的各孔中每孔加入已稀释的酶标抗体50 μL（以稀释液稀释50倍）。

（5）孵育：用封板膜覆盖酶标板，震荡20-30 s，混匀其中液体，室温（20-26 ℃）孵育2 h或37℃孵育1.5 h。有条件时可在转速为100 rpm的水平摇床上进行。

（6）洗涤：除去孔内液体，用1×洗涤液洗板3次，每次3-5 min，300 μL/孔，最后在干净的吸水纸上拍干。

（7）显色：加入显色液，100 μL/孔。室温（20-26 ℃）避光，20 min或37℃避光，20 min。

（8）终止：加入终止液，100 μL/孔（加入终止液的时间点可参考最高浓度标准品，当其呈现深蓝色时即可终止）。

（9）读数：立即用酶联免疫测定仪在波长450 nm条件下测定各孔的OD值（或在4 ℃保存1 h内测定，以630 nm作为参考波长）。

（10）计算：将校准品吸光度OD值作为横坐标（X），相应的校准品浓度作为纵坐标（Y），得到相应的校准曲线y=ax³+bx²+cx+d（不通过零点）。将样品OD值（X）由校准曲线换算出相应的浓度（Y），再乘以样品的稀释倍数，即可得到所测样品的Her2浓度。

（11）质控品：建议每次测试进行质控。如果质控结果与预期不符，提示检测结果不可靠，不应出具检测报告。应进行分析和查找原因，实施改进并保留记录。

由于地理、人种、性别及年龄等差异，建议各实验室建立自己的参考值，用于对患者结果进行诊断评估。

如样品中的Her2含量低于临界值（15.0 ng/mL），则表明Her2浓度在正常范围；本试剂盒用于检测乳癌期患者的Her2浓度，对于Her2浓度大于15.0 ng/mL的患者应进行多次检测，进行趋势分析，如果变化值大于或等于15%的增长认为是疾病有加重进展的趋势，增长小于15%则显示疾病无进展趋势。本试剂盒的测定结果仅是患者总体临床评估的一部分，还要结合临床其它诊断程序和信息进行乳腺癌管理。

如果样品Her2的含量不在本试剂盒校准品的线性范围内，则根据此标准曲线无法得到精确的结果。本试剂盒在0.16-20 ng/mL区间内未见倒钩效应。因临床样品需要稀释5或20倍后检测，所以临床样品的检测范围为0.78-100 ng/mL或3.3-400 ng/mL之间，对于浓度大于和等于100或400 ng/mL的样品，应对样品做进一步稀释后再测定。产品质控应在靶值范围内。

Her2/neu蛋白由细胞质区、跨膜区和细胞外区（ECD）组成。有报道ECD在正常个体的血清中存在，在部分乳癌转移妇女的血清中浓度升高^9-11。而且另有报道Her2/neu蛋白在很多起源于上皮的其它类型肿瘤如肺、胰腺、结肠、胃、卵巢、子宫颈和膀胱等癌症也有过度表达^12-18。

Her2浓度不能作为恶性肿瘤早期诊断或确诊依据。治疗前，已确诊乳腺癌的患者Her2浓度也常常在正常的浓度范围之内。此外，Her2浓度升高也会在非恶性疾病和非乳癌恶性疾病的患者中发现。

脂血(甘油三酯<20.0 mg/mL)、溶血（血红蛋白<25.0 mg/mL)、黄疸（胆红素<1.0 mg/mL）样品对Her2检测的影响不大。但仍不建议临床使用严重溶血、脂血、黄疸样品进行检测以最大限度减少它们对检测结果的影响。

在0.16-20 ng/mL浓度范围内，试剂盒的线性相关系数r≥0.9900，且无倒钩现象。

用已知浓度的待测物加入到血清基质中（1：9），其回收率R在80%-120%。

重复检测20孔零浓度校准品，求OD值的M（平均值）+2SD（标准差），代入校准曲线方程计算得到的含量不大于0.10 ng/mL。

血清样品稀释为两个浓度水平，各重复检测10孔，CV不大于15.0%。

以本试剂盒重复测定下列物质：人血清白蛋白60 mg/mL， IL-2 10 µg/mL，FGF 10 µg/mL，GM-CSF 10 µg/mL，IL-6 10 µg/ml，胸腺肽 10 µg/mL，EGFR 10 µg/mL，CA125200 U /mL，CA153200 U /mL，CEA10µg/mL，其交叉反应率不大于0.1%。

2．操作前应仔细阅读使用说明书，按照说明书的操作程序进行。

4．使用前试剂盒应置于室温平衡片刻，管内试剂建议离心后使用。

6．已开封的试剂盒应尽快使用，使用所剩试剂，按要求保存，防止污染。

7．安全性：本试剂盒中所采用的试剂都不具有毒性、致畸、致突变性，也不含有人血液制品，因此不具有生物学危害，但仍需作为一般生物试剂加以防护，样品、洗弃液和各种废弃物都应当按传染物处理。

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