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脂蛋白相关磷脂酶A2（LP-PLA2）测定试剂盒（酶联免疫吸附法）
说明书
【产品名称】
通用名称：脂蛋白相关磷脂酶A2（LP-PLA2）测定试剂盒（酶联免疫吸附法）
【包装规格】
48测试/盒、96测试/盒。
【预期用途】
本产品用于体外定量测定人血清样本中脂蛋白相关磷脂酶A2（LP-PLA2）的含量。
脂蛋白相关磷脂酶A2（LP-PLA2）主要由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌, 并受炎性介质的调节。动脉粥样硬化是世界上普遍发生的疾病之一，并且不断地年轻化，它对人类的健康及生命威胁极大。LP-PLA2作为一个新的炎性标志物，在冠状动脉粥样硬化的发生发展中起着重要的作用[1]，其水平升高是预测动脉粥样硬化相关的冠心病、缺血性卒中风险的一种独立危险因子[2]。因此测定LP-PLA2浓度以利于及早发现高危患者，采取积极措施合理控制，以延缓进展，稳定粥样硬化斑块，对预防动脉粥样硬化性脑梗死有一定的作用。
【检验原理】
本试剂盒应用双抗体夹心法测定。酶标板上预包被LP-PLA2抗体，当加入的待测血清样本中含有LP-PLA2或LP-PLA2校准品时，可与微孔板中吸附的LP-PLA2抗体结合，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的另一LP-PLA2单克隆抗体时，即可与微孔板中的LP-PLA2结合，经充分洗涤后，加入酶联免疫反应TMB底物，显色强度与样本中LP-PLA2的浓度成正相关。通过酶标仪检测吸光度（OD值），按照LP-PLA2校准品制定校准曲线，计算样本中LP-PLA2的含量。
【主要组成成分】
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名称 |
规格 |
主要组成成分 |
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1.LP-PLA2 包被酶标板 |
1块（96孔） |
1块（48孔） |
酶标板、LP-PLA2捕获抗体 |
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2.酶标抗体（液体） |
1瓶ⅹ6mL |
1瓶ⅹ3 mL |
辣根过氧化酶标记抗体 |
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3.校准品1（空白，液体） |
1瓶，800μL，目标浓度：0ng/mL |
1瓶,300μL，目标浓度：0ng/mL |
磷酸缓冲液，吐温（0.05%），牛血清白蛋白（5g/L）。 |
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4.校准品2（液体） |
1瓶，800μL，目标浓度：50ng/mL |
1瓶,300μL，目标浓度：50ng/mL |
LP-PLA2抗原，磷酸缓冲液，吐温（0.05%），牛血清白蛋白（5g/L）。 |
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5.校准品3（液体） |
1瓶，800μL，目标浓度：150ng/mL |
1瓶,300μL，目标浓度：150ng/mL |
LP-PLA2抗原，磷酸缓冲液，吐温（0.05%），牛血清白蛋白（5g/L）。 |
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6.校准品4（液体） |
1瓶，800μL，目标浓度：300ng/mL |
1瓶,300μL，目标浓度：300ng/mL |
LP-PLA2抗原，磷酸缓冲液，吐温（0.05%），牛血清白蛋白（5g/L）。 |
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7.校准品5（液体） |
1瓶，800μL，目标浓度：600ng/mL |
1瓶,300μL，目标浓度：600ng/mL |
LP-PLA2抗原，磷酸缓冲液，吐温（0.05%），牛血清白蛋白（5g/L）。 |
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8.校准品6（液体） |
1瓶，800μL，目标浓度：1200ng/mL |
1瓶,300μL，目标浓度：1200ng/mL |
LP-PLA2抗原，磷酸缓冲液，吐温（0.05%），牛血清白蛋白（5g/L）。 |
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9.20×洗涤液（液体） |
1瓶，50 mL |
1瓶，25 mL |
磷酸盐缓冲液，吐温（1%） |
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10.稀释液（液体） |
1瓶，25mL |
1瓶，13mL |
磷酸缓冲液，吐温（0.05%），牛血清白蛋白（5g/L）。 |
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11.显色液（液体） |
1瓶，12 mL |
1瓶，7 mL |
四甲基联苯胺（TMB）底物液。 |
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12.终止液（液体） |
1瓶，12 mL |
1瓶，7 mL |
盐酸（1M/L）。 |
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13.封板膜 |
3张 |
1张 |
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注：1、校准品具有批次特异性，具体浓度见标签。
2、本产品校准品溯源至企业工作校准品，经与已上市产品比对赋值。
【储存条件及有效期】
2~8℃保存，有效期为12个月。
生产日期及失效日期见盒签。
【适用仪器】
测量96孔标准通用规格微孔板酶标仪（仪器测定值范围应在OD：0.001~4.000之间），测定波长450nm，参比波长630nm。
【样本要求】
样本收集、处理：
按照国家临床实验室标准协会建议采用下列措施处理和储存血液样本：使用静脉穿刺术通用预防措施收集血液；1500 rpm离心10 min，离心前使血清样本充分凝结；保持样本加盖封闭并始终竖直向上。
样本的保存：
建议使用新鲜血液样本进行检测；样本如不即时检测，可将样本置于2~8 ℃，并于7天之内进行检测；或置于-20 ℃保存一年，并避免反复冻融。
【检验方法】
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15~30 分钟后方可使用：
1. 配液：以去离子水或蒸馏水将20×洗涤液稀释20倍，轻混以防起泡，混匀后使用。
试剂准备可参照下表进行。
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孔数 |
20×洗涤液（mL） |
纯水（mL） |
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48 |
25 |
475 |
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96 |
50 |
950 |
2.编号：将样本对应微孔按序编号。
3.加样：校准品孔：从6个校准品管里，各取100 μL，按照浓度由低至高的顺序将校准品加入酶标板中，每个浓度要更换新的吸头，根据需要可做2个重复孔。
样本孔：样本5μL+稀释液95μL加入孔中，根据需要可做2个重复孔。
4.加酶：每孔加入酶标抗体50μL，轻轻震荡混匀。
5.温育：用封板膜封板后置37度温育2小时。
6.洗涤：除去孔内液体，用1×洗涤液洗板3次，每次浸泡2 分钟，300 μL/孔，最后在干净的吸水纸上拍干。
7.显色：每孔加入显色液100μL，轻轻震荡混匀，用封板膜封板，37℃避光显色20分钟。
8.终止：加入终止液，100 μL/孔。
9.读数：立即用酶联免疫测定仪在波长450 nm条件下测定各孔的OD值（以630 nm作为参考波长）或在4 ℃保存1 h内测定。
10.计算：将校准品吸光度OD值作为横坐标（X），相应的校准品浓度作为纵坐标（Y），得到相应的校准曲线y=ax3+bx2+cx+d（不通过零点），r≥0.99。将样本OD值（X）由校准曲线换算出相应的浓度（Y），即可得到所测样本的LP-PLA2浓度。
【参考区间】
本试剂盒采用190例正常人血清样本进行测定，依据血清测定值正态分布的单侧95%置信区间，计算得到正常人的参考值范围为≤175 ng/mL（均值±1.64×标准差）。建议各实验室根据地理、人种、性别及年龄等差异建立自己的参考值范围。
【检验结果的解释】
本产品的检测结果不是临床适应症的唯一指标，分析检验结果应结合该病例既往数据及临床表现。
【检验方法的局限性】
本试剂盒测定范围为[50，1200]ng/mL。超出试剂盒测定范围的测定结果是通过校准品曲线外延得出的计算结果，不作为准确定量数据。
【产品性能指标】
1. 外观
试剂盒各组份齐全、完整，液体无渗漏；包装标签应清晰，易识别。
2. 准确度
用已知浓度的待测物加入到血清基质中，其回收率R应在85%~115%。
3. 空白检测限
应不大于30 ng/mL。
4. 线性
在[50，1200]ng/mL浓度范围内，试剂盒的相关系数r应不小于0.9900。
5. 重复性
血清样品稀释为两个浓度水平（150±10 ng/mL，600±100 ng/mL），各重复检测10孔，CV不大于15.0%。
6. 批间差
用三个批号试剂盒检测同一血清样品（150±10 ng/mL），则三个批号试剂盒之间的批间变异系数(CV)应不大于15.0%。
【注意事项】
1. 本试剂盒只限于体外检测，不得用于其它用途。
2． 酶标包被板开封后如未用完，板条应装入铝箔袋后放置于2~8 ℃保存，有效期1个月。
3． 20×洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
4． 请每次测定的同时做校准曲线，最好做复孔。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6． 底物请避光保存。
7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。
8． 安全性：本试剂盒中所采用的试剂都不具有毒性、致畸、致突变性，也不含有人血液制品，因此不具有生物学危害，但仍需作为一般生物试剂加以防护，样本、洗弃液和各种废弃物都应当按传染物处理。
9．不同批次试剂盒成份不能混用，所提供试剂不可以其他来源试剂替代，校准品实际浓度见瓶签。
10. 仅供体外诊断试剂使用，如不慎溅到人体表面如皮肤、眼睛必须用清水清洗如误食需到医院治疗。
【参考文献】
[1] Zalewski A，Macphee C. Role of Lipoprotein-associated Phospholipase A2 in atherosclerosis: biology，epidemiology, and possibLe therapeutic target[J]. ArterioscLer Thromb Vasc BioL，2005，25：923-331.
[2] Thompson A，Gao P，Orfei L，et aL.Lipoprotein-associated Phospholipase A2 and risk of coronary disease，stroke，and mortality：collaborative anaLysis of 32 Prospective studies[J]. Lancet，2010，375：1536-1544.
【基本信息】
注册人/生产企业名称：北京胜发兴生物技术有限公司
住所：北京市平谷区山东庄镇西沥津西路2号
联系方式：010-60938034（电话）010-60938034（传真）
售后服务单位名称：北京胜发兴生物技术有限公司
联系方式：010-60938034（电话）010-60938034（传真）
生产地址：北京市平谷区山东庄镇西沥津西路2号
生产许可证编号：
【医疗器械注册证书编号/产品技术要求编号】
【说明书核准日期及修改日期】 |
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